第一节　结核潜伏感染检查方法

由于结核潜伏感染的诊断没有病原学、影像学等检查结果的依据，需要通过检测机体的结核病特异性免疫反应判断是否为结核潜伏感染。目前，LTBI的检查方法主要为结核菌素皮肤试验、重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验和γ干扰素释放试验。

一、结核菌素皮肤试验

目前，全球仍有100多个国家使用结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test，TST）作为LTBI的检测技术。我国TST均使用结核纯蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）进行，PPD制剂有20IU/mL和50IU/mL两种规格。

1.适用对象与用途

适用于婴儿、儿童及成人，适用于结核分枝杆菌感染的诊断及病原性阴性肺结核的临床辅助诊断。

2.试验方法

在左前臂掌侧前1/3中央皮内注射0.1mL PPD，以局部出现直径为7～9mm大小的圆形橘皮样皮丘为宜。

3.结果测量

72h（48～96h）检查反应。以皮肤硬结为准。试验结果判断标准和意义：阴性（-）：硬结平均直径＜5mm或无反应者为阴性。阳性（+）：硬结平均直径≥5mm为阳性；硬结平均直径≥5mm，＜10mm为一般阳性；硬结平均直径为≥10mm，＜15mm为中度阳性；硬结平均直径≥15mm或局部出现双圈、水疱、坏死及淋巴管炎者为强阳性。

4.结果判断

在开展结核潜伏感染者预防性治疗和肺结核辅助诊断中，根据不同情况选择TST反应的大小。①在没有BCG接种或NTM干扰时，以PPD反应硬结平均直径≥5mm视为已受MTB感染；②在BCG接种地区或NTM感染地区，以PPD反应硬结平均直径≥10mm视为MTB感染；③对HIV阳性或接受免疫抑制剂治疗大于1个月以及与活动性肺结核患者有密切接触的未接种BCG的5岁以下儿童PPD反应硬结平均直径≥5mm视为MTB感染。

二、重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验

目前全球已研制成功的结核融合蛋白皮肤试验试剂包括丹麦研制的C-Tb、俄罗斯研制的Diaskintest和我国自主研发的重组结核杆菌融合蛋白（EC）［recombinant mycobacterium tuberculosis fusion protein（EC）］。重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验又称新型结核菌素皮肤试验（creation tuberculin skin test，C-TST）。重组结核杆菌融合蛋白（EC）系由高效表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10基因的大肠杆菌，经发酵、分离和纯化后获得的重组结核杆菌融合蛋白制成。该类试剂包含的结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10，在卡介菌和其他大多数NTM中不含这些抗原。因此，该试验可以有效鉴别卡介苗（BCG）接种与NTM感染。

1.适用对象

用于6月龄及以上婴儿、儿童及65周岁以下成人，结核潜伏感染的诊断和病原性阴性肺结核的临床辅助诊断。因试验结果不受卡介苗（BCG）接种和非结核分枝杆菌感染的影响，对儿童结核病诊断和NTM 高流行区人群检查具有更好的诊断价值。

2.产品规格

在我国上市使用的重组结核杆菌融合蛋白（EC）制剂产品规格有4种：每瓶0.1mL、0.3mL、0.5mL和1.0mL。

3.试验方法

在左前臂掌侧前1/3中央皮内注射，注射剂量为每人皮内注射0.1mL（5IU）。

4.结果测量

注射后48～72h检查注射部位反应，测量记录红晕和硬结的横径及纵径的毫米数，以红晕或硬结平均直径大者为判断标准。即如果红晕平均直径大于硬结平均直径，则以红晕平均直径作为判断标准，反之，如果硬结平均直径大于红晕平均直径，则以硬结平均直径作为判断标准。

5.阳性结果

判断反应平均直径（横径与纵径之和除以2）不低于5mm为阳性反应。即在实际应用判断中，重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验反应平均直径（横径与纵径之和除以2）≥5mm为阳性反应，不论重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验反应平均直径大小，凡有水疱、坏死、淋巴管炎者均属强阳性反应。

三、γ干扰素释放试验

γ干扰素释放试验（interferon-γ release assay，IGRA）是检测 MTB特异性抗原刺激T细胞产生的γ干扰素（IFN-γ）以判断是否存在MTB感染。IGRA有两种方法。

1.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测全血中致敏T淋巴细胞再次受到MTB特异性抗原刺激后释放IFN-γ水平，称之为全血检测或结核感染T细胞免疫检测。

2.采用酶联免疫斑点试验（enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT assay）测定在MTB特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能够释放IFN-γ的效应T细胞数量，称之为细胞检测或结核感染T细胞检测。

三种LTBI的检查方法，见表2-1。