第一节　农作物种子质量检验

一、《国际种子检验规程》的建立和发展

1924年，在英国剑桥召开的第四次国际种子检验大会上成立了国际种子检验协会（International Seed Testing Association，ISTA）。ISTA的宗旨是：“推动与种子检验和评价的所有有关问题”。其主要目的是制定、修订、出版和推行种子扦样与检验方法的标准程序，促进在国际贸易流通中广泛采用这些标准程序来评价种子质量，积极促进种子科学和技术各领域的研究。

1931年，在ISTA成员和Franck博士的共同努力下，ISTA颁布了第1版《国际种子检验规程》。1953年版《国际种子检验规程》解决了第1版中没有统一的净度和发芽定义问题，此后受到各国的重视和普遍采纳。1976年版《国际种子检验规程》正式分为规程和附件两部分，标志着规程趋向成熟。随着国际种子检验技术的不断发展，ISTA不断将先进、有效的种子检验方法补充到修订规程中，20世纪90年代后，ISTA基本遵循每3年对规程进行一次小修订，每6年进行一次全面修订。如今《国际种子检验规程》被经济合作与发展组织（OECD）的国际种子质量认证制度引用，成为举世公认的国际种子贸易流通必须遵循的准则，被世界各国所普遍采用。

2003年，ISTA秘书处正式颁发的《国际种子检验规程（2003）》在世界各国实施，其分为规程、附件和附录3个部分，由绪言、扦样、净度分析、其他植物种子数测定、发芽试验、生活力的生物化学测定、种子健康测定、种和栽培品种鉴定、水分测定、重量测定、包衣种子检验、生活力的离体胚测定、称重重复种子测定、X射线测定、活力测定、容许差距、国际种子检验证书17章组成。辅以若干图表和应用示例，详细描述了种子检验原理、定义、检验标准技术和程序。此规程适用于世界上的主要作物种类，但如果不涉及具体细节，则适用于任何作物，甚至适用于文中没有涉及的植物。

二、我国农作物种子检验技术的发展

除少数国家直接执行ISTA《国际种子检验规程》外，世界上大多数国家根据《国际种子检验规程》的标准化技术，结合本国的具体情况，制定了本国的种子检验规程。我国是农业大国，种子是农业最基本的生产资料，种子质量的控制尤为重要，国家相关部门对农业种子检验规程和相关法规的建立也十分关注。20世纪50年代初，国家启动了种子标准化建设工作，内容包括5个方面：种子检验规程、种子质量分级标准、种子生产技术规程、加工包装与贮藏标准和良种标准。通过这5个方面，对种子生产加工、包装、运输、贮存、种子检验方法和种子质量等方面做出明确的技术规定，并制定一系列技术标准，对种子产业的各环节进行有效管理。

1955年，农业部组织起草了《农作物种子检验方法和分级标准》，于1957年又对《农作物种子检验实施办法和主要农作物种子分级标准》进行了认真修改，第一次明确了种子质量分级的4项技术指标（纯度、净度、发芽率和水分）。1964年，农业部又重新拟定了《农作物种子检验试行办法和农作物种子分级试行标准》，进一步推动了种子检验技术的发展和普及。1975年，在总结各地规程和标准多年实践经验的基础上，农林部正式颁布了《主要农作物种子检验技术规程》和《主要农作物种子分级标准》。

20世纪80年代以来，我国直接吸收和借鉴了发达国家种子科学质量管理的先进技术，在对原有大部分种子检验规程和质量分级标准修订与补充的基础上，制定和颁布了《农作物种子检验规程》《牧草种子检验规程》《农作物种子质量标准》《蔬菜种子质量标准》《主要农作物种子包装》《主要农作物种子贮藏》等国家标准。为了满足我国农业发展与世界接轨的要求，我国于20世纪90年代重新修订和颁布了粮食作物（禾谷类和豆类）、经济作物（纤维类和油料类）、瓜菜作物（瓜类、白菜类、茄果类、甘蓝类和叶菜类）等主要农作物种子检验规程和质量标准。同时颁布了种子相关的普通法规和专业法规，对我国种子行业进行规范化管理，促进我国种子业健康迅速发展。1995年，我国颁布了等效采用ISTA规程技术的《农作物种子检验规程》（GB/T 3543.1—1995等），使我国的种子检验技术逐步接近国际水平。

多年国内外实践经验证明，种子标准化是指导种子现代化生产和质量管理最有效的办法，我国在这方面也取得了较大成就，但与发达国家相比较，还存在很大差距。中国成为世界贸易组织成员国以后，种子国际贸易对中国种子生产和质量管理提出了新的要求和更高的标准。随着种子科学技术的进步，人们对种子质量的认识不再局限于纯度、净度、发芽率和水分4项传统内容，种子活力和种子健康检验等要求日益加强，原有种子检验规程和种子质量分级标准以及品种标准所涵盖的内容已经远远不能适应种子产业发展的需要。目前我国正由传统农业向优质、高效、特色农业转变，随着社会发展的需求，以前许多不被重视的植物种植面积迅速扩大，特别是作为特殊经济作物类的药用植物，栽培种类多，种植面积大，生产经营规模小且不规范，繁殖用的种子具有很多与农作物不一样的特性，但至今为止几乎没有全国统一的种子检验规程和种子质量分级标准。为了满足种子产业发展的要求和消费者的需要，要积极借鉴和吸收国外先进的标准科研成果和检验技术，加紧对农作物种子检验规程和质量分级标准的修订工作，还要制定药用植物种子检验规程和质量标准，为中国种子产业健康发展和参与世界竞争提供技术支持与法律保障。

三、国内外农作物种子检验技术

种子质量是由不同特性组成的综合概念，这些特性对于种子不同产业部门——生产者、加工者、经营者、使用者及种子管理部门都极为重要。在种子检验中，种子质量一般可概括为2个方面，一是反映品种品质的纯度和真实性；二是体现种子播种品质的净度、千粒重、发芽率、生活力、活力、健康度、含水量等。尽管衡量种子质量特性较多，最终目的是要测定种子的种用价值。我国从20世纪50年代至今执行的农作物种子质量标准中，以纯度、净度、发芽率和水分4项指标对种子质量进行分级定级。但是随着种子产业发展的需要，在发达国家种子质量评价不再局限于传统的4项指标，对种子健康度、种子活力和品种纯度检验的要求也日益增多。种子检验项目中扦样、发芽率、千粒重、水分等检测项的检验技术在ISTA推动下已经发展成熟，并且被广泛引用于其他各国种子检验规程。下文从种子生活力和活力、种子纯度鉴定、种子健康检测等方面对国内外研究技术进行介绍。

（一）扦样

又称取样或称抽样。检验样品是从种子批不同部位随机抽取若干次的小部分种子合并而得，从该样品经一个或几个步骤分成几个更小的样品，每个步骤都要经过反复对分递减或随机抽取小量重新合并，以达到样品的充分混合，这个过程称为取样。室内检验取样时通常借助一种特制的扦样器进行，所以称为扦样。

（二）种子净度

样品中除去各种混杂物和其他植物的种子后，留下的本植物洁净种子重量占检验样品的总重量百分率，称为种子净度。

检验方法：从要测定的种子中取平均样品，称重（试样重量），计数后倒在试验台上，进行精选，分出净种子、无生命种子、其他植物种子，并分别称重，用公式求得种子净度（%）、无生命杂质百分率、其他植物种子百分率。应重复测2次以上，取其结果的平均值。

（三）种子生活力的快速测定

目前种子生活力快速测定方法主要有氯化三苯基四氮唑法（TTC法），红墨水染色法和溴麝香草酚蓝（BTB）法等，其他方法都有不同程度的局限性，但是TTC法更被大家接受。以下重点介绍TTC法的发展。

1942年，德国Soealed Hoheneim学校H.Lakon教授发明了TTC法，于第二次世界大战期间传入美国。1950年ISTA成立了TTC测定技术委员会，致力于世界TTC测定技术的发展和推广。1953年在爱尔兰都柏林世界大会上，ISTA第一次把TTC法列入《国际种子检验规程》。1996年，《国际种子检验规程》已将TTC法用于农业、园艺和林木的大多数种类种子生活力的快速测定。

TTC法根据种子生化代谢的强弱，经脱氢还原反应显现差异性红色特征，通过判断种子胚和主要结构组织染色状况来判断种子生活力。它适用于：①收获后需马上播种的种子；②具有深休眠特性的种子；③发芽缓慢的种子；④发芽末期未发芽的种子；⑤收获或加工损伤种子；⑥发芽试验中遇到异常问题时，检查不正常幼苗产生的原因或分析杀菌剂和包衣处理问题等。TTC法具有原理可靠、结果准确、不受种子休眠限制、方法简便、节时快速的特点，一般可在12～24h获得测定结果。国际多位种子科学家进行的标准发芽试验与TTC法的对比试验表明，TTC法测定结果与标准发芽率很接近，TTC法是最有希望代替发芽试验的方法。一般种子检验规程规定要求测定种子发芽率，以了解其在田间最大的发芽潜力，评价种子批的种用价值。但由于标准发芽试验存在程序多、耗时长等缺点。多年来，种子科学家都在寻找快速、简单和可靠的方法来代替发芽试验。E.E.Hardin认为，TTC法是代替发芽试验最有前途的方法，M.Kmse也认为TTC法是一种普遍代替发芽试验的方法，并认为在TTC法测定时，通过检查分离胚的根尖和盾片染色情况判断其生活力是有效的。E.Savonen认为，利用真空TTC（23.6kPa和1.0% TTC）测定欧洲赤松种子生活力的时间可缩短至10min。据文献报道，经过对小麦、水稻、天南星等种子发芽试验和TTC法的相关性研究，认为正确掌握TTC法完全可能代替发芽试验，并且其测定结果与标准发芽试验结果误差不超过2%，在容许差距范围内。如果用温水和H₂O₂快速预湿，增加TTC溶液浓度，提高染色反应温度和使用真空技术，大多数作物均可在3～5h得到TTC法测定的结果。

（四）种子活力测定技术

种子活力表示种子强壮程度，具体是指种子在广泛大田条件下能迅速、整齐地发芽，茁壮生长，并能长成正常幼苗和植株而达到丰产及优质的潜在能力，是种子优良性状的综合体现，是衡量种子质量的重要指标之一。

ISTA和北美官方种子认证协会（Association of Official Seed Certifying Agencies，AOSCA）在20世纪50年代就成立了活力测定委员会；20世纪80年代，在总结活力测定研究成果的基础上，ISTA和AOSCA分别编写了《活力测定方法手册》和《AOSA活力测定手册》。目前用于活力测定的方法有幼苗分级测定、幼苗生长测定、抗冷测定、低温发芽试验、加速老化试验、控制劣变、种子浸出液电导率测定、TTC含量测定、ATP含量测定等。由于种子活力测定是一项难以将结果具体量化的测定技术，每一种活力测定方法都需要对仪器、用品和测定条件做出明确、严格的规定，因此ISTA和AOSCA主要致力于加速老化试验和电导率测定2种种子活力测定方法的标准化。在《国际种子检验规程（2003）》中，ISTA已列入大豆、玉米和小麦种子加速老化试验和豌豆种子浸出液电导率测定的标准化技术。

1.电导率法

早在1928年电导率法便用于数种作物种子的质量测定，现在已成为预测豌豆种子田间出苗率的常规检验方法。该法在欧洲、北美、澳大利亚和新西兰等地广泛用于大粒作物种子。据报道电导率可有效地评价三叶草、紫花苜蓿、百脉根、扁蓿豆、红豆草、柠条和花棒等豆科牧草种子的田间表现。Powell等发现随箭舌豌豆种子活力下降，渗出物质如磷、还原糖、氨基酸等迅速增加。石海春等用电导率法测定18种基因型甜玉米种子活力的结果表明，电导率法可对玉米田间成苗能力进行预测。用电导率法测定豌豆种子、杂交水稻种子、山杏种子、沙棘种子、玉米种子活力，并结合这些种子的田间生产性能相关分析研究，认为电导率法能较好预测田间生长性能。

2.加速老化试验

加速老化试验最初用于测定商业种子的贮藏寿命，其中包括绛三叶和高羊茅等牧草种子，随后扩展至预测种子的田间出苗率等。加速老化试验现已成功用于三叶草、雀麦、黑麦草、羊茅和草芦属等种子活力的测定。老化试验的结果极易受温度和老化后种子含水量等因素影响，对于粒小、吸湿快的种子，由于老化处理后易发生腐烂造成种苗次生感染而影响测定结果的准确性。Mc Donald建议用饱和食盐水代替自来水，可控制老化时的相对湿度在80%以下，便于小粒种子的活力测定。颜启传等对杂交水稻种子活力进行研究，认为人工加速老化和自然老化种子在苗期后的生长发育特性存在本质差异。自然老化种子活力能持续影响田间整个生育过程的生产性能，最终影响产量；而人工老化种子活力只影响植株早期生产性能，但可随生长发育而逐渐修复，对后期生产性能几乎没有影响。

随着计算机技术的迅速发展，国外种子活力自动评价系统已经问世，Mc Cormac等开发了一个评价生菜种子批活力的自动系统，采用斜板发芽，用灰度摄像机采集幼苗图像，测得根长，通过平均根长来获得种子活力值。Hoffmaster等将计算机图像处理技术应用到生长33d的大豆幼苗上，开发了大豆种子活力自动评价系统，测定大豆种子的活力指数。通过系统获取幼苗图像并转换成数字化信息，将大豆幼苗分成正常幼苗和不正常幼苗两大类。然后对正常幼苗图像进行细化，分为6种类型，根据每个幼苗所属的类型将子叶去除，随后根据幼苗形状的类别，使用不同的算法决定幼苗骨架中需测量的部分，计算幼苗生长速率及生长均一性，并根据幼苗总长度和均一度得到代表该批大豆种子活力的活力指数。通过这种方法获得的数据精确、可靠性高。

虽然目前种子活力测定方法较多，但由于影响田间生产性能和潜力的因素复杂，还缺少准确、有效预测田间生产潜力的测定方法。ISTA活力测定委员会提倡今后应研究和开发更为准确并且用数量关系表示的种子活力测定新方法。

（五）种子真实性和品种纯度研究

种子真实性和品种纯度代表种子的遗传品质，是种子质量检验的两项首要内容。种子真实性（seed genuineness）是指一批种子所属品种、种或属与文件（品种证书、标签等）是否相同，是否名副其实。品种纯度（cultivar purity）是指品种在特征特性方面典型一致的程度，即一批种子中（或良种繁殖田块中）本品种的种子数（或株、穗数）占供检本作物（种）样品数的百分率。

目前，种子纯度和品种真实性鉴定大致有3种方法，即种子形态鉴定法或植株形态大田鉴定法、生化标记鉴定法、DNA分子标记鉴定法。

种子形态鉴定法一般在实验室进行，借助放大镜等手段对种子进行直接鉴定，此方法要求对种子形态结构熟悉，但形态相近的种子难以鉴定。大田鉴定法多采用异地鉴定，该法比较直观、可靠，但费时、费工、成本高，许多性状受栽培技术及环境因素的影响，其鉴定结果的准确性依赖观测者丰富的实践经验。此外，大量新品种不断涌现，有的新品种本身就缺乏可鉴定的新农艺性状，因此增加了鉴定难度。

生化标记鉴定法包括蛋白质电泳和同工酶电泳，特异酶类的活性试验及抗体反应等。用于小麦和大麦品种鉴定的聚丙烯酰胺凝胶电泳、豌豆属和黑麦草属品种鉴定的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、玉米杂交种子纯度和鉴别品种真实性鉴定的超薄层等电聚焦电泳等都已列入《国际种子检验规程（1996）》。经多种电泳方法的比较研究，专家一致认为，玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺酸性凝胶电泳贮藏蛋白谱带多态性丰富，鉴定品种效果好，方法简便。农业相关部门已着手制定标准化程序并推广应用；水稻种子酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳杂交水稻组合互补带清楚、稳定，鉴定效果好；白菜、番茄等许多蔬菜种子利用等电聚焦电泳，也有很好的鉴定效果。然而生化标记鉴定法要求检测的蛋白产物易提取，但蛋白质多态性有较严格的组织与时间、空间表达特异性。此外，蛋白质或同工酶极不稳定，受环境影响较大。

DNA分子标记鉴定法是以生物体的遗传物质，即DNA分子的多态性为基础的遗传标记，组成DNA分子的4种核苷酸在排列次序或长度上的任何差异都会产生DNA分子的多态性。用DNA分子标记方法鉴定种子质量，就是利用父本、母本及杂交种之间稳定遗传的DNA分子的多态性进行鉴定。由于DNA分子标记能够散布整个基因组，并能对几十个基因位点同时进行标记，因此理论上能够区分种子在基因型上存在的任何微小差异。分子标记技术的发展很快，已经有限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）、扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）、简单序列间区重复多态性（inter-simple sequence repeat，ISSR）、简单序列重复（simple sequence repeat，SSR）以及衍生出的序列特异性扩增区（sequencecharacterized amplified regions，SCAR）标记。近年来分子标记技术在植物种质鉴定上发挥了新的作用。

Smith利用RFLP技术，用38个探针酶组合准确鉴别了78个玉米杂交种，其中许多是用同工酶和蛋白质电泳技术难以区分的品种，但仍有少数杂交种间带型一样或差异太小。袁力行等利用56个探针酶组合在29个玉米自交系中检测到了187个等位基因变异。

郭景伦等利用RAPD分析了46个自交系，通过几个引物的组合将46个玉米自交系全部区分开；朱海山等应用RAPD标记鉴定番茄杂交种子纯度，从160条随机引物中筛选出一个引物，便可将杂交一代及其父本、母本三者清楚地区分开，同时也能鉴别其他混杂种子。此外，利用RAPD标记技术成功对辣椒、大白菜、油葵、甜瓜和西瓜等作物种子的真实性和纯度进行了鉴别。

应用AFLP标记技术对大白菜、甘蓝、向日葵、哈密瓜种子亲本和杂交种真实性及品种纯度进行鉴定，实验证明该方法对真假杂交种和亲本纯度的鉴定是可行的，并获得了与大田纯度检测一致的结果。

吴渝生等利用SSR标记建立了云南省推广的3个玉米杂交种及其亲本的标准DNA指纹图谱，用于玉米品种鉴定。刘勤红等筛选了217对异源四倍体棉花的SSR引物，获得了十几个足以区分“鲁棉研15号”父、母本及其F1的标记位点，为“鲁棉研15号”杂交种的纯度鉴定提供了准确、稳定、快捷、实用的方法。SSR标记具有很高的多态性，非常适用于品种鉴定研究。

于滟等通过对杂交油菜“蜀杂6号”父、母本和300个杂种F1代单株的父、母本的SCAR检测，建立了用SCAR-PCR检测“蜀杂6号”杂种纯度的方法并逐一对照大田F1生产种的表现型，验证了本方法的可靠性。欧阳新星等研究认为，通过某种DNA标记技术找到特征条带，采用SCAR技术设计引物，转换成SCAR标记，特异性强，不通过电泳就可以直接对PCR产物的有无进行检测。

用RAPD分析法对木蓝属药用植物进行种内分子水平上的鉴定研究，效果很好，实验结果表明RAPD分析法是一种有效的鉴定同属不同种植物的方法，有报道SSR和RAPD技术已成功用于鉴定党参的道地产区。采用分子生物学技术包括任意引物聚合酶链式反应（AP-PCR）和RAPD方法扩增蒲公英及其6种土公英混淆品的基因组DNA，获得清晰、可靠的DNA指纹图谱。根据琼脂糖凝胶上显示的DNA带型差异可鉴别蒲公英和土公英混淆品种。

转基因食品的安全性历来受到大家的关注。转基因玉米流通入市场后，一直备受争议。美国农业部食品安全检验局（FSIS）用RFLP分子标记技术为主，建立了快速、简便、易行的玉米种子纯度和品种真实性的鉴定方法，对转基因玉米生产的各环节进行严格的质量控制，确保产品和产品商标相一致，确保商品和转基因作物管理法规相一致。Bhattacharya报道印度竹子品种繁多，在造纸业中，使用SCAR分子标记技术对所用竹子具体品种进行鉴别，控制原料所用品种的纯度，保证产品质量。樱草属植物以变态花受到大家的关注，不同程度变态花的种子和植株在形态上难以鉴别，I.W.Manfield等用RAPD和SCAR分子标记，发现不同程度变态花的S等位点的花丝基因不一样，由此可有效鉴定不同程度变态花的种子和植株。在种质资源的收集分类和鉴定方面，分子标记已作为一种常规的技术，能够在很大程度上提高基因库的运作效率。

（六）种子健康检测

种子健康是种子质量构成的重要指标，健康优质种子是确保种植业成功，实现高产、优质、低耗、高效的保证。种子健康检测是检测种子是否携带病原菌（如真菌、细菌、病毒）、有害动物（如线虫、害虫）等，以便了解种子健康情况。它是一种预防和控制种传病虫害和有害杂草因种子跨国和跨地区贸易而引起大范围内传播的有效措施，并且为种子的安全贸易提供理论依据。世界很多国家在种子贸易中要求商家出示种子健康检测报告，因此很多发达国家专门建立种子健康检验室。我国开展种子健康检测工作起步较晚，但是种子健康测定已被列入《农作物种子检验规程》。

目前在我国种子健康检测的主要方法有种子目测法、洗涤检验法、吸水纸检验法、琼脂平皿法、胚计数法、幼苗症状测定法。琼脂平皿法在国内文献中报道较普遍。

汪国平等用琼脂平皿法对来自英国及波兰的2个相同品种的油菜种子样品种进行了健康检测，分析两个国家不同地区种子受油菜黑胫病病原菌感染的程度及菌系类型，发现两个品种间受病原菌感染的差异不大。谭仲夏等采用平板培养测定法分别对云南省8个烟草种子生产基地的烟草种子内部进行带菌检测和分离鉴定，结果表明8个样品中样品带菌率高达87.5%，烟草种子内部携带的真菌主要有链格孢菌、芽枝孢菌。龚月娟等采用PDA平皿法和滤纸法检测了市售5个牧草品种和3个草坪草品种种子样品内部和外部寄藏真菌优势菌群和各自的带菌量情况。吴利敏采用平皿培养方法分别对3种草花共计9个品种的种子样品进行了种子寄藏真菌检测、纯化、鉴定，结果表明3种草花种子寄藏真菌共有9种类型，并且各自的优势菌群和带菌量均不相同。孙君灵等用平皿法对我国棉花主产区的8个省24个县市种子枯、黄萎病菌带菌量进行了检测，结果表明，除新疆维吾尔自治区莎车县的种子外部未发现枯萎病菌外，其他地方的种子外部均携带枯、黄萎病菌，并且带菌量随地区不同呈现较大差异。吴学宏等对来自新疆等4个省区的14个西瓜品种进行种子检测，杨峻等对来自宁夏、陕西和内蒙古的紫花苜蓿、柠条、沙打旺、花棒和踏郎种子进行检测，均用平皿法测定出了种子内外所携带真菌的优势菌群、各自带菌量等带菌情况，并据此对种子进行了药剂消毒处理效果评价，为种子筛选出了合适的保健处理药剂。王建华等通过使用干检和吸水纸培养2种方法，对种皮为无色素组和有色素组的22份菜豆种质进行了健康检测研究。结果表明，肉眼可检测菜豆种子外观病害症状为虫蛀、皱缩、畸形和种皮变色。吸水纸培养检测发现在22份材料中共携带已知真菌11种，互隔链格孢霉、镰刀菌属、青霉属、根霉属真菌存在于绝大多数的供试材料中。种皮有色的种子真菌携带种类和感染百分率均低于白色种皮种子。种子畸形和皱缩严重影响种子的发芽成苗能力。肉眼检测菜豆种子外观健康结果可作为有效指标判定种质的健康状况。

琼脂平皿法、洗涤检验法和吸水纸检验法花费时间长，检测结果实验室之间差异大，因此种子病理学家积极发展更简便、快速、可靠的方法。

目前主要发展的方法有噬菌体-溶菌斑方法、血清学方法，多聚酶链反应（PCR）、RAPD及其他生化检测法。G.Kritzaman等利用PCR有效鉴定了辣椒种子欧文氏菌。J.Badul等利用PCR鉴定甘蓝种传霜霉病获得成功。罗来鑫等用实时PCR检测西红柿种子携带的番茄细菌性溃疡病菌，已取得不错的进展。J.G.Hampton等利用RAPD技术区分大豆茎溃疡病拟茎点霉菌和大麦网斑病核腔霉，并认为这是一种快速、准确、灵敏的健康测定方法。R.Corbiere等报道，利用酶联免疫吸附分析（DAS-ELISA）法检测豌豆细菌性茎枯病是一种可靠的方法。